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一、目的
使用沃特世ACQUITY UPC2™ 系統(tǒng)證明杏仁酸芐酯(benzyl mandelate)的快速手性分離和0.02%雜質(zhì)含量下的對(duì)映體過(guò)量測(cè)定。
二、背景
根據(jù)2005年9月的一期《化學(xué)和工程新聞》，銷售額排名前10位的藥品中有9種包含手性活性成分，而其中的5種藥品又包含單一對(duì)映體活性成分。單一對(duì)映體型手性藥物被認(rèn)為是改善了的化學(xué)實(shí)體，它能提供更高的藥效、更好的藥理學(xué)數(shù)據(jù)和更為有利的不良反應(yīng)數(shù)據(jù)。對(duì)于單對(duì)映體藥物的生產(chǎn)商而言，不需要的立體異構(gòu)體應(yīng)等同為其它有機(jī)雜質(zhì)。人用藥品注冊(cè)技術(shù)國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)已對(duì)鑒定、定量和控制藥用物質(zhì)及其制劑產(chǎn)品中雜質(zhì)的監(jiān)管要求作出了明確規(guī)定。根據(jù)ICH的要求，有機(jī)雜質(zhì)的鑒定和定量閾值為主要化合物的0.1%。
ACQUITY UPC2系統(tǒng)的高檢測(cè)靈敏度實(shí)現(xiàn)了對(duì)藥用物質(zhì)中對(duì)映體雜質(zhì)的鑒別和定量。
三、解決方案
圖1所示的杏仁酸芐酯是一種重要的藥物合成中間體。R-和S-杏仁酸芐酯的外消旋混合物(每種對(duì)映體溶于甲醇后的濃度均為0.20 mg/mL)使用UltraPerformance Convergence Chromatography™( UPC2™)進(jìn)行分離，其色譜圖如圖2所示。主要實(shí)驗(yàn)參數(shù)列于表1。總分析時(shí)間不到1.5分鐘。平均峰寬小于6秒。根據(jù)峰面積得出的R-和S-杏仁酸芐酯之比是0.997。
如表2所示，是5次連續(xù)進(jìn)樣的保留時(shí)間和峰面積的重現(xiàn)性數(shù)據(jù)。在0.20 mg/mL的濃度下，保留時(shí)間的重現(xiàn)性RSD值優(yōu)于0.23% ，峰面積重現(xiàn)性RSD值優(yōu)于0.5%。
圖3顯示了濃度為2 mg/mL的R-杏仁酸芐酯的UPC2色譜圖。經(jīng)紫外光譜確認(rèn)(結(jié)果未顯示)，1.30min處的小峰對(duì)應(yīng)于S-杏仁酸芐酯。S-杏仁酸芐酯雜質(zhì)峰的信噪比約為3(檢測(cè)限)，根據(jù)峰面積計(jì)算相當(dāng)于主峰的0.02%。檢測(cè)靈敏度的提高得益于這款整體設(shè)計(jì)的ACQUITY UPC2系統(tǒng)，其中包括經(jīng)改進(jìn)的泵系統(tǒng)和經(jīng)優(yōu)化的檢測(cè)器設(shè)計(jì)。本例中對(duì)映體過(guò)量(e.e.)值為99.96%。
四、總結(jié)
使用ACQUITY UPC2系統(tǒng)在不到1.5分鐘時(shí)間內(nèi)，成功完成R-和S-杏仁酸芐酯的UPC2手性分離。在每種對(duì)映體濃度均為0.20 mg/mL條件下，可獲得優(yōu)異的重現(xiàn)性(保留時(shí)間的重現(xiàn)性RSD優(yōu)于0.23%，峰面積RSD優(yōu)于0.5%)。新型泵系統(tǒng)和檢測(cè)器優(yōu)化設(shè)計(jì)帶來(lái)更高的檢測(cè)靈敏度，使測(cè)定0.02%對(duì)映體雜質(zhì)和對(duì)映體過(guò)量成為可能。AQUITY UPC2系統(tǒng)適用于微量對(duì)映體雜質(zhì)的分析、對(duì)映體過(guò)量測(cè)定和QA/QC分析。
