匯聚行業網友見解，傳遞微生物檢測知識，本次列出的問題均是微生物實驗基礎操作常見問題，食品微生物檢測小編咨詢專家老師后匯編，希望可以幫助朋友們對于實驗室日常檢測問題有個新的理解。大家感興趣的、比較關注的問題，也可以后臺留言或直接微我，我們一起交流探討！

請問下，營養瓊脂可以做環境監測嗎？之前用大豆酪蛋白測，這個和大豆酪蛋白效果有差距嗎？

有差距，建議用用TSA，如果沒有法規要求，NA也能拿來作為環境監測的培養基。

 

請教一下霉菌培養皿長在培養基里面的是厭氧菌嗎？

培養基里面的菌是需氧菌或者兼性厭氧菌，空氣在瓊脂培養基中有一定溶解度，能滿足一般菌生長需要，但不能培養嚴格厭氧菌；霉菌是好氧菌，長在里面的可能是酵母，挑出來染色鏡檢

 

固體樣品稀釋倍數遞進能取1ml到9ml里嗎？

固體樣品稀釋當然可以取1ml到9ml。課件里是指當液體樣品原液取樣1mL之后, 要做第一個10倍梯度稀釋時要取25mL加入225mL，后面的梯度就按1ml到9ml。

 

一次性牙簽的大腸菌群和霉菌，應該如何

制樣檢測？
按照木牙簽國家標準（LY/T 1159-2006）中的相關規定，依照GB 14934-2016消毒餐（飲）具 進行制樣，即棉簽擦拭法50cm2，按GB 4789.3-2016 大腸菌群計數MPN法檢測。按GB 4789.15-2016 霉菌和酵母計數，即稱量25g+225mL稀釋液均質后進行霉菌檢測。

 

標準儲存菌株可以傳代儲存菌株，再由儲存菌株變成工作菌株？

標準儲備菌株和儲備菌株一樣，都是后代，只不過一個是第一代。所以標準儲備菌株也是儲備菌株，也一樣可以拿去當工作菌株

 

采樣用鑷子和無菌盤都是用什么辦法滅菌的呢？

滅菌條件是什么？

金屬材質等耐高溫器皿首先采用高溫干熱滅菌，160℃，2h

菌種每次傳代都需要做鑒定嗎？

每批次按照方法驗收一下，可以加一些項目 比如純度檢查（革蘭氏染色鏡檢看菌體的一致性，以及劃線分離后看看平板上是一種形態的菌還是幾種（大部分細菌出現2種以上菌落形態可能是污染的，也有少部分同1種菌出現不同的形態）。

工作菌種保存的問題，一般冷凍到零下70℃能保存多久？

工作菌株 1批次放斜面管里 可以保存1-2個月（冷藏就好了，個別菌不能冷藏那就室溫保存）自己規定1個月還是2個月，到期銷毀，做好記錄；冷凍保存的甘油管 不要長期冷藏保存，否則菌會死掉  甘油管不適合冷藏；-80℃下一般細菌能放5年沒問題的

如何辨別培養基細小的點是不是細菌？是不是延長培養時間菌落就一定會變大？

依據樣品是什么而定，下次冰箱保存一個剛稀釋的樣品做對照；TTC，是化妝品安全技術規范方法允許的，識別菌落方便。

 

看形狀看凸起：通常菌落呈現圓形規則外觀、突出于培養基瓊脂平面的，而樣品渣滓不定形、凹陷于瓊脂內。

 

看增殖：作好標記繼續培養，菌落會有擴張。培養前提前拍照，與培養后的對照。接種時多接種一份平板，放4℃冰箱冷藏而不培養，用于與培養后的平板對照。

 

染色鏡檢：挑取可疑物，涂片子鏡檢觀察是否是菌。

速凍生制品（非即食的生制品）是否需要出廠檢測微生物？19295-2021中說非即食沒說要求檢測微生物，速凍食品生產許可證審查細則要求出廠檢測微生物？

菌落總數與大腸菌群指標實際上屬于指示菌指標，即其是食品生產過程衛生控制水平的表征；所以無論出廠及型式檢驗項目中是否設定相應指標，均有必要作為監測項目；出廠檢驗按照你執行的標準來操作，生產許可證辦理按照審核細則來檢測。

冷凍食品，需要怎么解凍呢？

45℃以下不超過15min,或2-5℃以下不超過18小時解凍。條件滿足可以

像PCA、孟加拉紅這類的培養基需要加熱煮沸后再滅菌，只需要煮沸一次就可以了嗎？VRBA也是只需要煮沸一次嗎？

需要高壓鍋滅菌的PCA、孟加拉紅，只需加熱幫助達到溶解，形成均勻液體，入鍋滅菌。而VRBA，是煮沸滅菌，看標準的配制方法，要保持沸騰2min 。

 

      標準菌株的用途？

1：制備人工污染樣品；2：驗收培養基，培養基做成了平板，有些是選擇性的，某種菌在上面有特殊的形態。所以菌選擇了培養基，培養基也選擇了菌；3：培訓新人方面。讓其了解什么培養基上面菌是什么樣子的；4：驗收生化試劑。和培養基差不多，也是有特征反應。5：實驗時候做質量控制。已知菌在某培養基或生化上面“應該”某種現象（概率），做出來后（事件）是，那就沒問題，做出來后（事件）現象不對，那么就可以反推是不是哪里出了問題，包括菌是不是原來的菌，大膽假設懷疑，小心求證找到原因。提高自己。

      微生物檢測各種菌，是否要做不確定度和回收率？

要做 依據RB/T 151-2016 食品微生物定量檢測的測量不確定度評估指南和SN/T 4091-2015 食品微生物學測量不確定度評估指南

      平板計數瓊脂和營養瓊脂都是用來測菌落的，是不是買哪一個都可以呀？

要看你用的國標是哪一版的，不同的國標用的培養基是不同的， 營養瓊脂和平板計數瓊脂營養成分不一樣，你要看你們執行標準后面有培養基的成分要求，可以按照這個執行要求來選擇培養基，一般4789.2都是用平板計數瓊脂

     食品車間的環境空氣沉降菌和食品接觸面的微生物指標，有人知道是參考哪個標準嗎？

參考GB15975和GBT16294兩個標準，具體數值要通過檢測靜態和動態的數據后看看產品合格時其數值大概范圍是多少。

     培養基檢查和方法適用性檢查怎么體現在實驗記錄中？

這兩個適用性不放在日常檢驗記錄里，要單獨起草培養基適用性記錄和方法適用性方案和報告。

     一次性的接種環分區劃線每次分區都需要更換一根嗎？

不需要更換，劃完一區后可以將接種環插進培養基以減少環上的菌，然后再繼續劃后面的區。

 

       單增李斯特菌的翻轉運動，用1600倍能看到嗎？具體詳細做法怎么做？

 

可以看到。將細菌懸液滴于蓋玻片（四周先涂上少量凡士林）中央，將凹玻片的凹窩對準蓋玻片中央的菌液蓋下，翻轉，鏡檢。由于細菌不受蓋玻片的壓力影響，所以此法常用于觀察區別細菌運動的方式。100倍油鏡下觀察。

 

 

      菌落計數如結果是連續三個稀釋度的結果是351、368、36、29、4、5，如何計數？

取在30-300范圍內的計數，本例（36+29）/2=32.5, 假設，連續三個梯度分別是10倍、100倍、1000倍，結果報告為3300。