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常見測蛋白濃度方法的優缺點比較(一)

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-11-04  來源:上海炎熙生物科技有限公司
核心提示:蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎上根據不同情況選用恰當的方法,以滿足

蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎上根據不同情況選用恰當的方法,以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結果精確,但操作復雜,用于大批量樣品的測試則不太合適;Lowry法精確度較高,但是比較費時,且每步的時間要求相對嚴格;Bradford法靈敏簡便,但易受去垢劑的影響;BCA法以其試劑穩定,抗干擾能力強,結果穩定,靈敏度高而受歡迎。

1. Bradford法:

原理:在酸性環境中,蛋白質結合考馬斯亮藍G250染料,導致染料的吸收峰發生位移,從紅棕色形式(吸收峰 465nm)轉化為藍色形式(吸收峰 610nm)。這兩種形式在 595nm 處光吸收差異most大,因此 595nm 是測定考馬斯染料-蛋白復合物的藍色的best波長。結合到每個蛋白質分子上的考馬斯染料分子數大致與蛋白所帶正電荷的數量成正比,因此通過比色法可以測定溶液中蛋白質的含量。

優點:

1. 靈敏度高,可以檢測到1μg/ml的蛋白質濃度。

2. 反應時間短,反應時間只需5-10分鐘。

3. 操作簡單,只需加入試劑,混合均勻即可。

4. 適用范圍廣,適用于大部分類型的蛋白質。

5. 不受溶液中還原劑的影響。

缺點:

1. 受干擾:某些離子和化合物會干擾測定結果,去垢劑(表面活性劑)會產生強烈干擾,使得與許多常用的緩沖液不兼容。

2. 靈敏度不穩定:不同蛋白質的靈敏度不同,有些蛋白質可能無法被檢測到。肽或蛋白質的分子量必須大于 3,000 道爾頓才能被檢出。

3. 需要標準曲線:需要制備標準曲線來計算蛋白質濃度,增加了操作步驟。

近來市場上已出現能兼容去垢劑的Bradford法蛋白定量試劑盒,可以兼容各種常用的蛋白緩沖液,大大拓展了應用范圍。

編輯:songjiajie2010

 
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