由酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法可知，酶標(biāo)儀應(yīng)該用比色法來分析抗原或抗體的含量，即它應(yīng)依照比色原理進(jìn)行工作。實(shí)際上，酶標(biāo)儀就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)幾乎相同。圖1是一種單通道、自動(dòng)進(jìn)樣的酶標(biāo)儀的工作原理圖。

光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后，成為一束單色光束。該單色光束經(jīng)過塑料微孔板中的待測(cè)標(biāo)本，被標(biāo)本吸收掉一部分后，到達(dá)光電檢測(cè)器。光電檢測(cè)器將投射到其上面的光信號(hào)的強(qiáng)弱變成電信號(hào)的大小。此電信號(hào)經(jīng)前置放大、對(duì)數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等模擬信號(hào)處理后，送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算。最后由顯示器和打印機(jī)將測(cè)試結(jié)果顯示、打印出來。

微處理機(jī)還通過控制電路來控制X、Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)的運(yùn)動(dòng)。但對(duì)于非自動(dòng)型的酶標(biāo)儀，它是用手工來移動(dòng)微孔板的，可以省去X、Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)及其電路，這樣的儀器體積更小，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單。

微孔板是一種用來盛裝待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排小孔，如有40孔板、55孔板和96孔板等多種規(guī)格。每個(gè)小孔可以盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。根據(jù)儀器的不同，既可以一個(gè)孔一個(gè)孔地檢測(cè)，也可以一排孔一排孔地檢測(cè)。

酶標(biāo)儀既可以使用和分光光度計(jì)相同的單色器，也可以使用干涉濾光片來獲得單色光。和光電比色計(jì)一樣，使用濾光片作過濾裝置時(shí)，將濾光片設(shè)計(jì)到微孔板的前面和后面效果是一樣的。

光源燈發(fā)出的光，經(jīng)過聚光鏡、光闌后，到達(dá)反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后，垂直通過比色液，然后再經(jīng)濾光片到達(dá)光電管。

一般酶標(biāo)儀的光束既可以設(shè)計(jì)成從上到下通過比色液，也可以設(shè)計(jì)成從下到上通過比色。

酶標(biāo)儀有單通道和多通道兩種類型，單通道又分為自動(dòng)型和手動(dòng)型兩種。其中，自動(dòng)型的儀器設(shè)有X和Y兩個(gè)方向的驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)，在機(jī)械裝置的驅(qū)動(dòng)下，微孔板上的小孔一個(gè)個(gè)依次進(jìn)入光束下面測(cè)試。手動(dòng)型靠手移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測(cè)量。

在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上，又發(fā)展了多通道、全自動(dòng)型酶標(biāo)儀。多通道酶標(biāo)儀一般都是自動(dòng)型的，它設(shè)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器。如8通道的儀器，設(shè)有8條光束（或8個(gè)光源）、8個(gè)檢測(cè)器和8個(gè)放大器。在機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下，樣品被8個(gè)一排、8個(gè)一排檢測(cè)。多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度快，但其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，價(jià)格也較貴，多用于大中型醫(yī)院。

酶標(biāo)儀的其他部分的結(jié)構(gòu)，與光電比色計(jì)和小型生化分析儀基本相同。

區(qū)別02

酶標(biāo)儀和普通光電比色計(jì)的不同之處在于：

1)盛裝比色液的容器不是使用比色皿，而是使用了塑料微孔板，塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作，之所以采用塑料微孔板來作固相載體，是利用它對(duì)抗原或抗體有較強(qiáng)的吸附這一特點(diǎn)；

2)酶標(biāo)儀的光束是垂直通過待測(cè)液的；

3)酶標(biāo)儀通常不使用A而是使用光密度OD來表示吸光度。

酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)的主要區(qū)別是什么呢？具體差別體現(xiàn)在以下三個(gè)方面：

1)盛裝待測(cè)溶液的容器：分光光度計(jì)用的是比色皿，酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用，每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液。

酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成，對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，因此用它作為固相載體，酶標(biāo)板通常為48孔或96孔，每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。

2)光路的方向：分光光度計(jì)是水平光路，而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。

垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測(cè)樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。

3)光路的長(zhǎng)度：由于光密度(OD值)與吸光系數(shù)，待測(cè)組分的濃度以及光路長(zhǎng)度成正比關(guān)系。

分光光度計(jì)采用的比色杯的寬度通常是1cm，所以光路長(zhǎng)度固定為1cm。因此不同儀器，不同批次測(cè)量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。

酶標(biāo)儀采用的是垂直光路，所以光路的長(zhǎng)度應(yīng)該是液體液面的高度，所以測(cè)得的值受到樣品的體積的影響。