于同一批號的三個運輸包裝中至少抽取12個最小銷售包裝樣品，1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣．另1/2樣品（可就地封存）必要時用千復檢。抽樣的最小銷售包裝不應有破裂，檢驗前不得啟開。

在100級凈化條件下用無菌方法打開用千檢測的至少3個包裝，從每個包裝中取樣，準確稱取10g土1g樣品。剪碎后加人到200mL滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到一個生理鹽水樣液。液體產品用原液直接做樣液。

如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導致不能吸出足夠樣液時，稀釋液量可按每次50mL遞增．直至能吸出足夠測試用樣液。在計算細菌菌落總數與真菌菌落總數時相應調整稀釋度。

本方法適用于產品初始污染菌與細菌菌落總數（以下統稱為細菌菌落總數）檢測。

1 操作步驟

待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作菌落計數。共接種5個平皿．每個平皿中加入1mL樣液．然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養瓊脂培養基15~20mL倒入每個平皿內混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉平皿35℃士2℃培養48h后，計算平板上的菌落數。

2 菌落總數計算

X1--細菌菌落總數CFU/g或CFU/mL

A--營養瓊脂培養基平板上的細菌菌落總數；

K--稀釋度。

當菌落數在100以內，按實有數報告，大于100時采用二位有效數字。

如果樣品菌落總數超過本標準的規定，按B2.3進行復檢和結果報告。

3 復檢方法

將留存的復檢樣品依前法復測2次，2次結果平均值都達到本標準的規定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結果平均值超過本標準規定，則判定被檢樣品不合格。

1 操作步驟

取樣液5mL接種50mL乳糖膽鹽發酵管，置35℃士2℃培養24比如不產酸也不產氣，則報告為大腸菌群陰性。

如產酸產氣，則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板，置35℃士2℃培養18~24h，觀察平板上菌落形態。典型的大腸菌群為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落．

取疑似菌落1~2個作革蘭氏染色鏡檢，同時接種乳糖發酵管，置35℃士2℃培養24h，觀察產氣情況。

2 結果報告

凡乳糖膽鹽發酵管產酸產氣．乳糖發酵管產酸產氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。

1 操作步驟

取樣液5ml,加人到50mLSCDLP培養液中，充分混勻，置35℃士2℃培養18~24h如有綠膿桿菌生長，培養液表面呈現一層薄菌膜，培養液常呈黃綠色或藍綠色。從培養液的薄菌膜處挑取培養物，劃線接種十六炾三甲基漠化欽瓊脂平板，置35℃士2℃培養18~24h，觀察菌落特征。綠膿桿菌在此培養基上生長良好，菌落扁平邊緣不整，菌落周圍培養基略帶粉紅色，其他菌不長。

取可疑菌落涂片作革蘭氏染色．鏡檢為革蘭氏陰性菌者應進行下列試驗：

氧化酶試驗、綠膿菌素試驗、硝酸鹽還原產氣試驗、明膠液化試驗、42℃生長試驗

綠膿菌素試驗：取2~3個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養基斜面，35℃士2℃培養24h,加人三氯甲燒3~5mL，充分振蕩使培養物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲燒呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。

2 結果報告

氧化酶及綠膿桿菌試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。

如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。

1 操作步驟

取樣液5mL．加人到50mLSCDLP培養液中，充分混勻，置35℃士2℃培養24h。

自上述增菌液中取1~2接種環，劃線接種在血瓊脂培養基上，置35℃士2℃培養24~48h在血瓊脂平板上該菌落呈金黃色．大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。

挑取典型菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：

甘露醇發酵試驗：取上述菌落接種甘露醇培養液，置35℃士2℃培養24h，發酵甘露醇產酸者為陽性。

血漿凝固酶試驗：玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿．挑取菌洛分別與生理鹽水和血漿混合，5min如血漿內出現團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無 凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現象，再進行試管凝固酶試驗；

試管法：吸取1:4新鮮血漿0.5ml，放滅菌小試管中，加人等量待檢菌24h肉湯培養物0.5mL。混勻，放35℃士2℃溫箱或水浴中．每半小時觀察一次．24h之內呈現凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物各0.5mL作為陽性與陰性對照。

2 結果報告

凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。

1 操作步驟

取樣液5mL加入到50mL葡萄糖肉湯，35℃士2℃培養24h。

將培養物劃線接種血瓊脂平板，35℃士2℃培養24h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明溶血圈。

挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢，應為革蘭氏陽性，呈鏈狀排列的球菌．鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：

鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2rnL(0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經離心沉淀．吸取上清液），加人0,8mL滅菌生理鹽水，混勻后再加入待檢菌24h肉湯培養物0.5mL和0.25％氯化鈣0.25ml，混勻放35℃士2℃水浴中，2min觀察一次（一般10min內可凝固），待血漿凝固后繼續觀察并記錄溶化時間。如2h內不溶化，繼續放置24h觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24h仍不溶化為陰性。

桿菌膚敏感試驗：將被檢菌菌液涂布血平板上，用滅菌攝子取每片含0.04單位桿菌膚的紙片放在平板表面上，同時以已知陽性菌株作對照，在35℃士2℃下放置18~24h，有抑菌帶者為陽性。

2 結果報告

鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現溶血圈鏈激酶和桿菌肽試驗陽性．可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。

1 操作步驟

待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作真菌計數。共接種5個平皿，每個平皿中加入1mL樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培養基15~25mL倒人每個平皿內混合均勻，瓊脂凝固后翻轉平皿置25℃士2℃培養7天，分別于3、5、7天觀察，計算平板上的菌落數，如果發現菌落蔓延，以前一次的菌落計數為準．

2 結果報告

X2--真菌菌落總數，CFU/g或CFU/mL；

B--5塊沙氏瓊脂培養基平板上的真菌菌落總數；

K--稀釋度。

當菌落數在100以內，按實有數報告，大于100時采用二位有效數字。

如果樣品菌落總數超過本標準的規定，進行復檢和結果報告。

3 復檢方法

將留存的復檢樣品依前法復測2次，2次結果都達到本標準的規定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結果超過本標準規定，則判定被檢樣品不合格。

1 操作步驟

取樣液5mL加人到50mL沙氏培養基中、25℃士2℃培養7天，逐日觀察有無真菌生長。

2 結果報告

培養管混濁應轉種沙氏瓊脂培養基，證實有真菌生長，可報告被檢樣品檢出真菌。